腫瘤組織是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、藥物篩選與臨床分子檢測(cè)的核心樣品來(lái)源。對(duì)腫瘤組織進(jìn)行高效、保質(zhì)地細(xì)化處理，是后續(xù)核酸提取、蛋白分析、基因組測(cè)序等流程的前置關(guān)鍵步驟。然而腫瘤組織對(duì)溫度變化極為敏感——研磨過(guò)程中產(chǎn)生的機(jī)械熱易導(dǎo)致RNA降解、蛋白質(zhì)變性失活，直接影響下游數(shù)據(jù)的可靠性。

此次實(shí)驗(yàn)采用上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀，在可控低溫條件下對(duì)腫瘤組織進(jìn)行研磨處理，旨在驗(yàn)證冷凍研磨方案對(duì)生物大分子完整性的保護(hù)效果，同時(shí)獲取滿足RNA提取所需的樣品破碎粒度。

實(shí)驗(yàn)儀器與解決方案

實(shí)驗(yàn)儀器：上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀

冷凍研磨儀一種快速、高效、可控溫的研磨系統(tǒng)。在高頻擺動(dòng)作用下，研磨球在研磨倉(cāng)內(nèi)高速撞擊及摩擦，短時(shí)間內(nèi)完成樣品的研磨、粉碎、混合及細(xì)胞破壁，同時(shí)制冷模塊持續(xù)提供低溫環(huán)境，有效抑制研磨產(chǎn)熱對(duì)樣品的破壞。

冷凍研磨儀助力樣品前處理研磨的實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 稱取適量腫瘤組織，分裝至若干無(wú)酶離心管內(nèi)，每支離心管投入不銹鋼研磨珠，按照實(shí)驗(yàn)規(guī)范加入定量 Trizol 試劑，逐一編號(hào)標(biāo)記。

2. 開(kāi)啟 CLN 冷凍研磨儀制冷模塊，設(shè)定預(yù)冷溫度，將裝好樣品的離心管整齊裝入金屬適配器，樣品對(duì)稱排布、配平裝載，連同適配器放入研磨倉(cāng)預(yù)冷。

3. 預(yù)冷完成后，將適配器卡入 CLN 研磨儀卡槽，鎖緊固定螺母，確認(rèn)制冷模塊持續(xù)運(yùn)行。

4. 儀器觸屏設(shè)置運(yùn)行參數(shù)，參數(shù)確認(rèn)無(wú)誤后啟動(dòng)設(shè)備。

5. 程序全部運(yùn)行結(jié)束，待儀器完全停止振蕩后，打開(kāi)設(shè)備取出離心管觀察破碎狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)：

1. 離心管內(nèi)腫瘤組織 + Trizol 總體積不得超過(guò)離心管容積 1/3，

2. 金屬適配器必須對(duì)稱均衡擺放樣品。

3. Trizol 試劑具有腐蝕性與刺激性，全程佩戴一次性乳膠手套，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

腫瘤組織樣品前處理研磨前后實(shí)驗(yàn)效果對(duì)比圖：

冷凍研磨儀對(duì)腫瘤組織樣品前處理研磨的效果圖可由上圖看出，樣品組織細(xì)化程度呈現(xiàn)均一狀，無(wú)殘留，RNA/RIN 值7.8（完整性好），組織樣品的蛋白活性保留率>90%。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

經(jīng) CLN 冷凍研磨儀處理后的腫瘤組織樣品，肉眼可見(jiàn)組織從完整塊狀變?yōu)榫鶆蛉榘咨隣钜海瑹o(wú)可見(jiàn)組織碎片殘留。加入 Trizol 的裂解液呈均一狀態(tài)，表明細(xì)胞已完全破壁、核酸充分釋放。

與常溫研磨對(duì)照組相比，冷凍研磨組提取的RNA完整性指數(shù)（RIN值）顯著提升，降解片段明顯減少，證明 -50°C制冷環(huán)境有效抑制了研磨過(guò)程中的核酸酶活性與熱變性。